Russian Journal of BiotherapyRussian Journal of BiotherapyРоссийский биотерапевтический журнал1726-97841726-9792Publishing House ABV Press310.17650/1726-9784-2015-14-1-11-14ORIGINAL REPORTSОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИCANCER STEM CELLS ANTIGENS EXPRESSION AT MELANOMA CELL LINESЭКСПРЕССИЯ МАРКЕРОВ СТВОЛОВЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК НА КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКАOborotovaM. V.ОборотоваМарина Вячеславовна
Russian Federation
vendettaflower@mail.ruBurovaO. S.БуроваО. С.
Russian Federation
BaryshnikovaM. A.БарышниковаМ. А.
Russian Federation
ZabotinaT. N.ЗаботинаТ. Н.
Russian Federation
BaryshnikovK. A.БарышниковК. А.
Russian Federation
MikhailovaI. N.МихайловаИ. Н.
Russian Federation
MorozovaL. F.МорозоваЛ. Ф.
Russian Federation
SuraevaN. M.СураеваН. М.
Russian Federation
KadagidzeZ. G.КадагидзеЗ. Г.
Russian Federation
BaryshnikovA. Yu.БарышниковА. Ю.
Russian Federation
FSBSI «N.N. Blokhin RCRC»ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина»30032015141111410042018https://bioterapevt.abvpress.ru/jour/article/view/3

The aim of this work was to study antigen expression associated with cancer stem cells at human metastatic melanoma transplantable cell lines received in FSBSI «N.N. Blokhin RCRC». Expression of CD133, CD117, CD34, CD90, CD24, CD44 associated with cancer stem cells has been explored in immunofluorescence reaction with monoclonal antibodies. Isospecific antibodies which values of immunofluorescence didn't increase 0,5%-level of positive cells were used for negative control. The cancer stem cells antigen expression was heterogeneous. If we take 10% antigen-positive cells for discrimination level, we can see CD133-expression at 6 (28,5%) cell lines of 21, CD117 - at 6 (28,5%) cell lines of 21, CD90 - at 12( 57%) of 21 lines, CD34 - at 4(19%) of 21 cell lines, CD44 - at 17(81%) of 21 cell lines and CD24 - at 5 (23,8%) of 21 lines. This antigens expression was less than 10% (from 1 to 8.5%) at other cell lines. After cloning mel Ibr cell line that expressed on surface about 8.5% of CD133 in semi-solid agar, the clone of cells expressed 100% CD133+ cells was obtained. Thus, tumor cells expressing a small percentage of CSC-associated antigens are also CSC, and other antigen-negative cells are their descendants.

Целью данной работы стало изучение экспрессии антигенов, ассоциированных со стволовыми опухолевыми клетками, на перевиваемых клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина». В реакции прямой иммунофлуоресценции с помощью МКА была изучена экспрессия антигенов CD133, CD117, CD90, CD34, CD44 и CD24, ассоциированных с СОК. В качестве отрицательного контроля использовали изоспецифические антитела, с которыми показатели флюоресценции не превышали 0,5% антиген-положительных клеток. Экспрессия антигенов, ассоциированных с СОК, была гетерогенна. Если принять за дискриминационный уровень 10% антиген-положительных клеток, то экспрессия CD 133 и СЭ117наблюдалась на 6 (28,5%), CD90 - на 12 (57%), CD 34 - на 4 (19%), CD 44 - на 17 (81%) и CD 24 - на 5 (23,8%) из 21 линии. На других линиях клеток экспрессия этих антигенов составила менее 10% (1+8,5%). При клонировании в полужидком агаре клеток линии mel Ibr, экспрессирующих на своей поверхности 8,5% антигена CD133, был получен клон клеток, экспрессирующих 100% CD133+. Таким образом, опухолевые клетки, экспрессирующие небольшой процент СОК-ассоциированных антигенов, также являются СОК, а остальные антиген-отрицательные клетки - их потомками.

стволовые опухолевые клеткимеланомамоноклональные антителапроточная цитометрияcancer stem cellsmelanomamonoclonal antibodiesflow cytometryАфанасьева Д.А., Барышникова М.А., Щербаков А.И. и др. Разработка модели противоопухолевой липосомальной вакцины // Иммунология. - 2014. - № 6. - С. 17-21.Афанасьева Д.А., Барышникова М.А., Соколова З.А., Косорукое B.C. Разработка липосомальной конструкции, содержащей лизат опухолевых клеток // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 5.Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 1990. - № 8. - С. 4.Барышников А.Ю. Иммунологический фенотип ранних гемопоэтических клеток-предшественников человека // Эксперим. онкология. - 1993. - Т. 15, № 6. - С. 3-7.Барышников А.Ю. Взаимодействие опухоли и иммунной системы организма // Практическая онкология. - 2003. - Т. 4, № 3. - С. 127-30.Барышников А.Ю. Принципы и практика вакцинотерапии рака // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - 2004. - № 2. - С. 59-63.Барышников А.Ю., Барышникова М.А. Иммунолипосомы и мишени их действия // Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И. Менделеева. - 2012. - T.LVI, № 3-4. - C. 60-7.Барышников А.Ю., Демидов Л.В., Михайлова И.Н., Петенко H.H. Современные проблемы биотерапии опухолей // Вестник Московского Онкологического Общества. - 2008. - № 1. - С. 6-10.Бережной А.Е., Сапрыкина Н.С., Козлов А.М. и др. Изучение противоопухолевой активности вакцин на основе генетически модифицированных опухолевых клеток, секретирующих ГМ-КСФ // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 47-53.Боценовский В.А., Барышников А.Ю. Молекулы клеточной адгезии // Успехи современной биологии. - 1994. - Т. 114, № 6 - С. 741Брюховецкий И.С., Брюховецкий A.C., Мищенко П.В., Хотимченко Ю.С. Роль системных механизмов миграции и хо-уминка стволовых клеток в развитии злокачественных опухолей центральной нервной системы и разработке новых методов противоопухолевой терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т.12, № 14. - С. 3-12.Заботина Т.Н., Седяхина H.H., Хорошко Н.Д. и др. Коэкспрессия антигена CD34 ранних гемопоэтических предшественников и антигена Fas/APO-1, опосредующего апоптоз // Экспериментальная онкология. - 1994. - Т. 16, № 4-6. - С. 343-7.Кадагидзе З.Г., Тупицын H.H., Заботина Т.Н. и др. Иммунофенотипические и функциональные особенности стволовоклеточных лейкозов // Российский онкологическии журнал. - 1996. - № 1. - С. 43-8.Кадагидзе З.Г., Тупицын H.H. Заботина Т.Н. и др. Дифференцировочные антигены ранних предшественников гемопоэтических клеток человека // Вестник ОНЦ. - 1996. - № 2. - С. 27-34.Михайлова H.H., Ковалевский Д.А., Бурова О.С. и др. Экспрессия раково-тестикулярных антигенов в клетках меланомы человека // Сибирский онкологическии журнал. - 2010. - Т. 37, № 1. - С. 29-39.Михайлова H.H., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы - основа для создания противоопухолевых вакцин // Вестник РАМН. - 2005. - № 7. - 37-40.Михайлова H.H., Бибилашвили Р.Ш., Ковалевский ДА. Раково-тестикулярные антигены как потенциальные мишени для вакцинотерапии опухолей // Российский биотерапевтический журнал. - 2010.-Т. 9, № 4. - С. 17-26.Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Клименко О.В. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 62-6.Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Багирова Н.С. и др. Стерилизация многослойных протеолипосом // Российский биотерапевтическии журнал. - 2012. - Т. 11, № 1. - С. 13-8.Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Бурова О.С. и др. Сравнение уровня экспрессии HSP70 на клеточных линиях меланомы // Российскии биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 1. - С. 43-8.Туркина А.Г., Моисеенкова H.H., Фролова К.А. и др. «Примитивный» вариант бластного криза хронического миелолейкоза // Тер. архив. - 1995. - Т. 67, № 7. - С. 22-5.Фролова Е.А., Френкель М.А., Лебедева Н.Б.и др. Моноклональные антитела ICO-115 к антигену CD34 человека // Вестник ОНЦ РАМН. - 1994. - Приложение. - С. 10-2.Al-Hajj M., Wicha M.S., Benito -Hernandez A. et al. Prospective identification of tumorogenic breast cancer cells // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2003. - P. 3983-8.Barker N., van Es J.H., Kuipers J. et al. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5 // Nature. - 2007. - 449(7165). - P. 1003-7.Bonnet D., Dick J.E. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoetic cell // Nature. - 1997. - 3(7). - P. 730-7.Chen X., Zhang J., Zhang J et al. Cancer stem cells, epithelial-mesenchymal transition, and drug resistance in high-grade ovarian serous // Human Pathology. - 2013. - 44(11). - P. 2373-84.Kim C.F., Jackson E.L., Woolfenden A.E. et al. Identification of bronchioalveolar stem cells in normal lung and lung cancer // Cell. - 2005. - 121(6). - P. 823-35.Michailova I.N., Morozova L.Ph. Golubeva V.A. et al. Cancer/testis genes expression in human melanoma cell lines // Melanoma Research. - 2008. - № 5. - P. 303-13.Ricci-Vitani L., Lombardi D.G., Pilozzi E. et al. Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells // Nature. -2007. - 445(7123). - P. 111-5.Shackleton M., Vaillant F., Simpson K.J. et al. Generation of a functional mammary gland from a single stem cell // Nature. -2006. - 439(7072). - P. 84-8.Stingl J., Eirew P., Ricketson I. et al. Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells // Nature. - 2006. -439(7079). - P. 993-7.Turkina A.G., Baryshnikov A.Y., Sedyakhina N.P. et al. Studies of P-glycoprotein in chronic myelogenousleukaemia patients: Expression, activity and correlations with CD34 antigen // British Journal of Heamatology. - 1996. - 92. - P. 88-96.Turkina A.G., Zabotina T.N., Kusnetzov S.V. et al. Studies of some mechanisms of drug resistence in chronic myeloid leukemia (CML) // Advances in Experimental Medicine and Biology. - 1999. - 457. - P. 477-88.Stavrovskaya A.A., Sedyakhina N.P., Stromskaya T. et al. Prognostic value of P-glycoprotein and correlation with CD34 antigen // British J. Heamatology. - 1998. - 28(5-6). - P. 469-82.Valentin S., Bruttel J. Cancer Stem Cell Immunology: Key to Understanding Tumorigenesis and Tumor Immune Escape? // Frontiers Immunology. - 2014. - 5. - P. 360.Woo T., Okudela K., Mitsui H. et al. Prognostic value of CD133 expression in stage I lung adenocarcinomas // Int J Clin Exp Phatol. - 2010. - 4. - P. 32-42.