Russian Journal of BiotherapyRussian Journal of BiotherapyРоссийский биотерапевтический журнал1726-97841726-9792Publishing House ABV Press156710.17650/1726-9784-2025-24-3-29-35ORIGINAL REPORTSОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИProduction and characterization of monoclonal antibodies to synthetic human ferroportin peptideПолучение и характеристика моноклональных антител к ферропортину человекаhttps://orcid.org/0009-0008-6104-5233KhotulevaMargarita G.ХотулеваМ. Г.
Russian Federation

Margarita Gennadievna Khotuleva

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

Маргарита Геннадьевна Хотулева

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

khotulevamargarita@gmail.comhttps://orcid.org/0009-0009-7115-7797SadovskayaYana O.СадовскаяЯ. О.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0009-0000-0317-9948KarimovaAnastasia O.КаримоваА. О.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

20 Myasnitskaya St., Moscow 101000

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

101000 Москва, ул. Мясницкая, 20

https://orcid.org/0000-0002-8602-6599VarlamovNikolay E.ВарламовН. Е.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-5694-3492KhochenkovDmitriy A.ХоченковД. А.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-6598-873XMironovaMaria V.МироноваМ. В.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0003-0218-8265GusevDmitriy V.ГусевД. В.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-5465-6094SolopovaOlga N.СолоповаО. Н.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115522

115522 Москва, Каширское шоссе, 24

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Ministry of Health of RussiaФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава РоссииNational Research University Higher School of EconomicsФГАОУ ВО «Национальный исследовательский университет “Высшая школа экономики”»3009202524329353009202530092025https://bioterapevt.abvpress.ru/jour/article/view/1567

Background. Ferroptosis is  a  type of  non-apoptotic iron-dependent form of  regulated cell death. Ferroportin is the only exporter of iron from cells, however, the involvement of ferroportin in cell ferroptosisis poorly understood. Activation or blocking of  ferroptosis pathways may provide a  therapeutic strategy for the  treatment of a  number of diseases. Control of ferroportin expression will make it possible to select a more effective tumor therapy. Obtaining monoclonal antibodies to human ferroportin will help to further study its role in ferroptosis of tumor cells.

Aim. Obtaining and characterization of monoclonal antibodies to human ferroportin.

Materials and methods. Mouse monoclonal antibodies against a synthetic peptide corresponding to the ferroportin protein region were obtained using hybridomic technology. The peptide was synthesized by the method of solid-phase automatic synthesis.

Results. A 15-membered peptide with the sequence ELKQLNLHKDTEPKP (ELK) was selected and synthesized. Conjugates of the synthetic peptide with carrier proteins were obtained. 4 stable hybridomic clones were obtained, and samples of monoclonal antibodies were obtained. The samples were successfully tested using methods of flow cytometry, enzyme immunoassay, and polyacrylamide gel electrophoresis.

Conclusion. Four antibodies against ferroportin binding the ELK peptide were obtained and characterized. The antibodies can be used in further studies of iron transport in tumor cells.

Введение. Ферроптоз – это тип неапоптотической железозависимой формы регулируемой гибели клеток. Единственным экспортером железа из клеток является ферропортин, однако его вовлечение в ферроптоз клеток малоизученно. Активация или блокировка путей ферроптоза может обеспечить терапевтическую стратегию при лечении ряда заболеваний. Контроль экспрессии ферропортина позволит подобрать более эффективную терапию опухоли. Получение моноклональных антител (МкАт) к ферропортину человека поможет при дальнейшем изучении его роли в ферроптозе опухолевых клеток.

Цель исследования – получение и характеристика МкАт к ферропортину человека.

Материалы и методы. Методом гибридомной технологии получены мышиные МкАт против синтетического пептида, соответствующего участку белка ферропортина. Пептид синтезировали методом твердофазного автоматического синтеза.

Результаты. Выбран и синтезирован 15-членный пептид с последовательностью ELKQLNLHKDTEPKP (ELK). Получены конъюгаты синтетического пептида с белками-носителями. Получено 4 стабильных гибридомных клона, наработаны образцы МкАт. Образцы успешно протестированы с использованием методов проточной цитометрии, иммуноферментного анализа, электрофореза в полиакриламидном геле.

Заключение. Получены и охарактеризованы 4 антитела против ферропортина, связывающие пептид ELK. Антитела могут быть использованы в дальнейших исследованиях транспорта железа в опухолевых клетках.

ferroportinmonoclonal antibodyferroptosisiron transportenzyme immunoassayферропортинмоноклональное антителоферроптозтранспорт железаиммуноферментный анализThis work was supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (the Federal Scientific-Technical Programme for Genetic Technologies Development for 2019–2030, Agreement No. 075-15-2025-493 dated 30.05.2025).Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (Федеральная научно-техническая программа развития генетических технологий на 2019–2030 гг., соглашение № 075-15-2025-493 от 30.05.2025).Holohan C., Van Schaeybroeck S., Longley D., Johnston P.G. Cancer drug resistance: an evolving paradigm. Nat Rev Cancer 2013;13(10):714–26. DOI: 10.1038/nrc3599Okada H., Mak T.W. Pathways of apoptotic and non-apoptotic death in tumour cells. Nat Rev Cancer 2004;4(8):592–603. DOI: 10.1038/nrc1412Dixon S.J., Lemberg K.M., Lamprecht M.R. et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell 2012;149(5):1060–72. DOI: 10.1016/j.cell.2012.03.042Dixon S.J., Lemberg K.M., Lamprecht M.R. et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell 2012;149(5):1060–72. DOI: 10.1016/j.cell.2012.03.042Galluzzi L., Vitale I., Aaronson S.A. et al. Molecular mechanisms of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2018. Cell Death Differ 2018;25(3):486–541. DOI: 10.1038/s41418-017-0012-4Halliwell B. The wanderings of a free radical. Free Radic Biol Med 2009;46(5):531–42. DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2008.11.008Halliwell B. The wanderings of a free radical. Free Radic Biol Med 2009;46(5):531–42. DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2008.11.008Lisova A.E., Baranovskiy A.G., Morstadt L.M. et al. The iron-sulfur cluster is essential for DNA binding by human DNA polymerase ε. Sci Rep 2022;12(1):17436. DOI: 10.1038/s41598-022-21550-4Lisova A.E., Baranovskiy A.G., Morstadt L.M. et al. The iron-sulfur cluster is essential for DNA binding by human DNA polymerase ε. Sci Rep 2022;12(1):17436. DOI: 10.1038/s41598-022-21550-4Hassannia B., Wiernicki B., Ingold I. et al. Nano-targeted induction of dual ferroptotic mechanisms eradicates high-risk neuroblastoma. J Clin Invest 2018;128(8):3341–55. DOI: 10.1172/JCI99032Li J., Cao F., Yin H.L. et al. Ferroptosis: past, present and future. Cell Death Dis 2020;11(2):88. DOI: 10.1038/s41419-020-2298-2Hassannia B., Vandenabeele P., Vanden Berghe T. Targeting ferroptosis to iron out cancer. Cancer Cell 2019;35(6):830–49. DOI: 10.1016/j.ccell.2019.04.002Vartanian A.A. Iron metabolism, ferroptosis and cancer. Rossijskij bioterapevticeskij zurnal = Russian Journal of Biotherapy 2017;16(3):14–20. (In Russ.). DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-3-14-20Вартанян А.А. Метаболизм железа, ферроптоз, рак. Российский биотерапевтический журнал 2017;16(3):14–20. DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-3-14-20Uniprot. URL: https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q9NP59/entry.Köhler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256(5517):495–7. DOI: 10.1038/256495a0Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry 1971;8(9):871–4. DOI: 10.1016/0019-2791(71)90454-xEngvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry 1971;8(9):871–4. DOI: 10.1016/0019-2791(71)90454-xLaemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680–5. DOI: 10.1038/227680a0