Background. Plasma circulating tumor DNA (ctDNA) is a potential marker for tumor process monitoring. However, the feasibility of using mouse syngeneic subcutaneous melanoma model to assess ctDNA levels remains unclear.
Aim. To evaluate the feasibility of ctDNA detection in mouse B16-F10 melanoma model using droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR).
Materials and methods. We developed and validated a ddPCR assay to quantify plasma ctDNA from B16-F10 cells. To form experimental tumors, C57Bl6 mice were inoculated with B16-F10 cells. On the first, 7th, 14th , 21st days after tumor inoculation blood was collected by retroorbital sinus puncture. ctDNA was extracted from blood plasma. On the 21st day after tumor inoculation mice were sacrificed.
Results. We validated a ddPCR assay to quantify plasma ctDNA in B16-F10 melanoma syngeneic model in C57Bl6 mice. The assay linear range was 0.5–32 copies/ul, R2 = 0.997. The empirical limit of detection of ctDNA was 1 copy/ul in 5 ng normal tissue genomic DNA background. The coefficient of variation values ranged from 44.5 % (1 copy/ul) to 16.6 % (16 copies/ul). Plasma ctDNA was detected on 21st day after tumor inoculation in B16-F10 melanoma syngeneic subcutaneous model (p = 0.004). ctDNA concentration positively correlated with tumor volume (ρ = 0.95, p = 0.05) and total circulating DNA concentration (ρ = 1, p = 0.0).
Conclusion. B16-F10 melanoma syngeneic subcutaneous model in C57Bl6 mice can be used to monitor cDNA in studies of new approaches for melanoma treatment.
Введение. Циркулирующая в плазме крови опухолевая ДНК (цоДНК) является потенциальным маркером для мониторинга опухолевого процесса. Однако возможность использования мышиной сингенной подкожной модели меланомы для оценки уровня цоДНК остается неясной.
Цель исследования – оценка уровня детектируемой цоДНК в мышиной сингенной модели меланомы B16-F10 методом цифровой капельной полимеразной цепной реакции (цкПЦР).
Материалы и методы. Для количественного определения цоДНК из клеток B16-F10 в плазме крови был разработан и валидирован метод цкПЦР. Для получения экспериментальных опухолей мышам линии С57Bl6 подкожно вводили суспензию клеток линии мышиной меланомы B16-F10. Через день, на 7-, 14- и 21-й дни после перевивки опухоли у мышей отбирали кровь из ретроорбитального синуса. Из плазмы крови выделяли циркулирующую ДНК. На 21-й день после перевивки опухоли животных выводили из эксперимента.
Результаты. Разработан и валидирован метод цкПЦР для детекции цоДНК в сингенной модели меланомы B16-F10 у мышей линии С57Bl6. Аналитический сигнал линеен в диапазоне 0,5–32 копии/мкл, значение R2 составило 0,997. Эмпирический предел обнаружения цоДНК составил 1 копию/мкл в присутствии 5 нг геномной ДНК нормальной ткани. Значения коэффициента вариации состояли в диапазоне от 44,5 % (для 1 копии/мкл) до 16,6 % (16 копий/мкл). Циркулирующая опухолевая ДНК в сингенной модели меланомы B16-F10 у мышей линии С57Bl6 достоверно детектируется на 21-й день после перевивки опухолевых клеток (p = 0,004). Уровень цоДНК коррелирует с объемом опухоли (ρ = 0,95, p = 0,05) и уровнем циркулирующей ДНК (ρ = 1, p = 0,0).
Заключение. Мышиная сингенная подкожная модель меланомы B16-F10 может использоваться для мониторинга уровня цоДНК при исследовании новых подходов для лечения меланомы.